FRAP, FRET, FLIM, TIRF & PHOTOMANIPULATION

Les approches de microscopie avancée telles que la TIRF, la FRAP, la FRET ou la FLIM permettent d’explorer la dynamique et les interactions moléculaires à l’échelle subcellulaire avec une résolution spatiale et temporelle élevée. Complémentaires des techniques de microscopie confocale classiques, elles offrent un accès privilégié à l’étude des membranes, du cytosquelette, de la mobilité des protéines ou encore aux interactions moléculaires au sein des échantillons vivants.

TRI-Genotoul développe ces approches pour répondre à des problématiques biologiques variées. La microscopie TIRF (Total Internal Reflection Fluorescence) permet l’observation sélective des événements se produisant à proximité immédiate de la membrane plasmique grâce à une excitation confinée sur quelques dizaines à centaines de nanomètres. Les techniques de FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) permettent quant à elles d’étudier la mobilité et le renouvellement de molécules fluorescentes dans les cellules vivantes. Les approches FRET (Förster Resonance Energy Transfer) et FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy) donnent accès à l’analyse d’interactions moléculaires et de proximités nanométriques entre protéines marquées par fluorophores, ouvrant la voie à une caractérisation fine des mécanismes cellulaires dynamiques in situ.

Les techniques de FRAP, optogénétique, la photo-activation ou la photo-ablation permettent d’étudier et de manipuler le vivant, afin d’analyser la dynamique cellulaire, l’expression génétique ou le remodelage de structures cellulaires. Les pinces optiques, basées sur l’utilisation de la lumière, offrent quant à elles une manipulation non invasive d’objets cellulaires et permettent de mesurer avec une très grande précision des forces et propriétés physiques à l’échelle nanométrique.

Basées sur l’utilisation de la lumière pour capturer et déplacer des objets, les pinces optiques constituent quant à elles une technique non-invasive permettant de manipuler les organites et de mesurer les forces de tension ou d’adhésion cellulaires. De plus, le système d’interférométrie localise les objets au nanomètre près pour affiner la mesure de leurs propriétés physiques.