Après le module de super-résolution STED implémenté sur un microscope confocal Leica SP8, la plateforme d’imagerie du CPTP intègre une nouvelle expertise dans ce même domaine, avec de l’imagerie de fluorescence de super-résolution, en la matière de la “nanoscopie dSTORM”. En outre, la plateforme de l’IBCG c’est quant à elle doter d’un système similaire nSTORM.
La microscopie confocale est une approche approximative de la localisation des plus petits organites cellulaires, des domaines de spécialisation intracellulaires, ou bien encore des protéines membranaires. Le développement récent de microscopes de super-résolution, ou nano-microscopes, permet de dépasser la barrière de diffraction optique qui limite la résolution des approches conventionnelles, rendant ainsi possible la visualisation d’objets de l’ordre de quelques dizaines de nanomètres.
Filaments d’actine à gauche avec un confocal classique et à droite avec la technique de reconstruction dSTORM. Source : R. Houmadi (plateau imagerie CPTP)
L’ approche de super-résolution la plus précise (résolution de 20 nm), est celle de la microscopie de localisation. Elle repose sur le principe de la détection d’une molécule unique et de la localisation du centre de sa tache de diffraction. L’accumulation des acquisitions permet alors la reconstitution d’une image super-résolue. Le PALM (PhotoActivated Localization Microscopy), et le STORM (STochastic Optical Reconstruction Microscopy) sont autant de techniques de reconstruction d’image par pointillisme permettant d’isoler les molécules uniques émettrices de façons différentes.
Le dSTORM et nSTORM ouvrent ainsi un nouveau champ d’exploration pour interroger les détails de la localisation des molécules régissant les interactions cellulaires à une résolution de quelques dizaines de nanomètres sur préparation fixée.
Les plateaux techniques d’imagerie cellulaire du CPTP et de l’IBCG ont acquis une véritable expertise en développant des approches de type STORM en microscopie TIRF. Ces compétences s’étendent de la mise au point de protocoles de préparation d’échantillons fixés (cf. filaments d’actine photo ci-dessus) à l’optimisation des conditions d’acquisition et de reconstruction d’image pour l’élaboration d’images de super-résolution mono-couleur en 2D.
Statif nSTORM -© D.Villa
Caractéristiques techniques
d-STORM
- TIRF
- Laser 640 nm de 400 mW .
n-STORM
- TIRF
- Lasers : 405nm (100mW), 488nm (200mW), 561nm (200mW), 647nm (300mW)