Contrairement à la microscopie photonique, la microscopie électronique requiert obligatoirement un pré-traitement lourd des échantillons à observer. L’objectif pour les plateformes d’électronique est donc de proposer des méthodes d’observation des échantillons au plus prêt de leur état natif. La plateforme du CMEAB vient de développer une méthode de préparation des échantillons par cryofixation permettant de mieux respecter l’intégrité de l’échantillon.
Cupule conçue pour l’observation en cryo-MEB.
La cryofixation des échantillons est une technique très délicate, devant être utilisée dans des conditions optimales afin d’éviter l’apparition de cristaux d’eau modifiant de façon importante l’ultrastructure des échantillons. Pour se faire, La cryofixation à haute pression est actuellement la seule technique permettant de cryofixer les échantillons sans utilisation de surcouches de protection (cryoprotectant) dont les épaisseurs, avoisinant les 200μm, altère l’aspect de ce dernier.
La plateforme du CMEAB a pour cette raison choisi la cryofixation haute pression comme technique privilégiée afin de préparer des échantillons pour l’observation après cryofracture en MEB. Le verrou technologique rencontré était l’absence d’adaptateur permettant la fixation des cupules du cryofixateur haute pression. L’objectif au sein du groupe de travail du RCCM a donc été de fabriquer un adaptateur permettant :
- la fixation des cupules du cryofixateur haute pression (EM-ICE ou HPM100, Leica),
- de se fixer au support des modules de Cryo-préparation en MEB (Alto, Gatan ou PP300 et PP3010T Quorum).
Cette technique a été testé et appliqué pour l’observation avec succès de l’ultrastructure de cardiomyocytes de souris.
Ultrastructure du cardiomyocyte observée par la technique décrite dans le cadre de la publication.