Après la super résolution Elyra PS.1, le plateau d’Imagerie de l’I2MC se dote d’un nouveau module haute résolution Airyscan implémenté sur un microscope confocal LSM 780 (Zeiss).
En plus de ses 2 détecteurs PMT classiques, ce microscope est équipé d’un détecteur haute sensibilité de type GaAsP. Grâce à son rendement quantique, deux fois plus efficace que le PMT classique, ce microscope est capable d’acquérir des images à partir de faibles intensités lumineuses. Fort de cette sensibilité, l’installation de l’Airyscan permet d’acquérir des images en haute résolution (140nm en latéral (xy) contre 200nm en confocal).
Le détecteur Airyscan est particulièrement utile quand l’échantillon, en raison de ses marquages faibles et/ou labiles, ne peut pas être imagé en super résolution (risque de photobleaching). Finalement la possibilité de basculer du mode confocal à Airyscan sur le même échantillon (fixé ou vivant) facilite son utilisation.
Illustrations
Réseau de microtubules (15nm) sur cellules RPE1: en microscopie confocale LSM780 (gauche), haute résolution Airyscan (milieu) et super résolution SIM-Elyra PS.1 (droite). Echelle 10µm. ©Déborah MICHEL, I2MC
Microtubules (15nm) sur cellules RPE1: en microscopie confocale LSM780 (gauche) et super résolution SIM-Elyra PS.1 (droite). ©Déborah MICHEL, I2MC
Pour rappel les techniques de microscopie de super-résolution
- Structured Illumination Microscopy (SIM): résolution xy = 90nm; z = 350nm / fluorophores classiques
- Photoactivated Localisation Microscopy (PALM) : résolution xy = 20 nm; z = 50nm / sondes organiques photoactivables (tag eGFP, LifeActin)
- direct Stochastic Reconstruction Microscopy (dSTORM) : résolution xy = 20 nm; z = 50nm / fluorophores classiques (AF647), tampons particuliers, montage sur place