STREAK-FLIM MONO OU BIPHOTON

FLIM

Un outil unique pour caractériser les interactions

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Telephone : 05 34 32 38 37
Le streak-FLIM (Fluorecence Lifetime Imaging Microscopy) est une technique unique développée par la plateforme d’imagerie de la FRAIB et permettant de révéler des interactions protéines-protéines, protéines-ADN ou des changements de conformation spatiale. Basé sur la mesure des durées de vie des fluorochromes, les molécules se transférant l’énergie si elles sont suffisamment proches pour interagir, apporte de nombreuses informations sur ces dernières. Ces mesures sont en revanche indépendantes de la concentration de la molécule et de son intensité de fluorescence.

Services :

FLIM

  • Mise en évidence d’interactions moléculaires (protéine – protéine, protéine – ADN…) par mesure de la durée de vie de fluorescence du donneur en absence ou en présence d’un accepteur.
  • Détection par Streak caméra, (Streakscope Hamamatsu) permettant la mesure de durée de vie avec une résolution de l’ordre de la picoseconde.
  • Temps d’acquisition variable (de quelques secondes à quelques dizaines de secondes) selon l’intensité de fluorescence et le type d’information recherché (durée de vie par ROI ou sur la base du pixel).

Mode d’accès :

  • Assistance
  • Projet collaboratif
  • Prestation de service

Caractéristiques techniques :

  • Microscope inversé Nikon TE2000
  • Images x, t (t en pleine échelle variable selon la rampe de tension appliquée aux électrodes de déflection de 1 ns à 1 µs).
  • Images x, t avec piles d’images en y.
  • Obtention des courbes de décroissance de la fluorescence pour une ROI ou par pixel.
  • Détermination des paramètres ai et ti par ajustement au moindre carré des courbes expérimentales obtenues (moindres carrés non linéaires, ou maximum de vraisemblance).
  • Traitement des données via logiciel Tau-MAP home-made.

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Désignation
Contact
Lieu
FLIM biphoton
  • Laser Infrarouge Tsunami Spectra Physics femtoseconde accordable à l’excitation entre 700-1000 nm. Sélecteur d’impulsion permettant d’adapter la fréquence de pulse à la fréquence de travail du capteur.
  • Diode pulsée picoseconde 403nm (pour excitation monophoton DAPI).
  • Diode pulsée picoseconde 445nm (pour excitation monophoton CFP).

 

FLIM monophoton
  • Diode pulsée picoseconde 442nm.
  • Diode pulsée picoseconde 464nm.
Alain Jauneau / Cécile Pouzet

05 34 32 38 37

imageriefraib@lrsv.ups-tlse.fr

FRAIB – Campus INRA Auzeville

Ressources complémentaires

 

Quelques publications réalisées avec le concours de l’instrument :

  • Dorian Farache, Alain Jauneau, Cécile Chemin, Marine Chartrain, Marie-Hélène Rémy, Andreas Merdes and Laurence Haren. Functional analysis of Gamma-tubulin Complex Proteins indicates specific lateral association via their N-terminal domains. JBC, 2016
  • A. Testard, D. Da Silva, M Ormancey, C. Pichereaux, C. Pouzet, A. Jauneau, S. Grat, E. Robe, Brière, V. Cotelle, C. Mazars and P. Thulleau. Calcium- and Nitric Oxide-Dependent Nuclear Accumulation of Cytosolic Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase in Response to Long Chain Bases in Tobacco BY-2 Cell. Plant Cell Physiol, 2016
  • Marçal Soler, Anna Plasencia, Romain Larbat, Cécile Pouzet, Alain Jauneau, Susana Rivas, Edouard Pesquet, Catherine Lapierre, Isabelle Truchet and Jacqueline Grima-Pettenati. The Eucalyptus linker histone variant EgH1.3 cooperates with the transcription factor EgMYB1 to control lignin biosynthesis during wood formation. New Phytologist, 2016
  • Judith Fliegmann, Alain Jauneau, Carole Pichereaux, Charles Rosenberg, Virginie Gasciolli, Antonius C.J. Timmers, Odile Burlet-Schiltz, Julie Cullimore and Jean-Jacques Bono. LYR3, a high-affinity LCO-binding protein of Medicago truncatula, interacts with LYK3, a key symbiotic receptor. Febs Letters, 2016
  • Clementine Le Roux,Gälle Huet, Alain Jauneau, Laurent Camborde, Dominique Tremousaygue, Alexandra Kraut, Binbin Zhou, Marie Levaillant, Hiroaki Adachi, Hirofumi Yoshioka, Sylvain Raffaele, Richard Berthome, Yohann Coute, Jane E. Parker,and Laurent Deslandes. A Receptor Pair with an Integrated Decoy Converts Pathogen Disabling of Transcription Factors to Immunity. Cell, 2015
  • Josep Vilarrasa-Blasi, Mary-Paz Gonzalez-Garcıa, David Frigola, Norma Fabregas-Vallve, Konstantinos G. Alexiou, Nuria Lopez-Bigas, Susana Rivas, Alain Jauneau, Jan U. Lohmann, Philip N. Benfey, Marta Ibanes, and Ana I. Cano-Delgado Regulation of Plant Stem Cell Quiescence by a Brassinosteroid Signaling Module. Developmental Cell, 2014
  • Stella Cesari Gaëtan Thilliez, Cécile Ribot, Véronique Chalvon, Corinne Michel, Alain Jauneau, Susana Rivas, Ludovic Alaux, Hiroyuki Kanzaki, Yudai Okuyama, Jean-Benoit Morel, Elisabeth Fournier, Didier Tharreau, Ryohei Terauchi and Thomas Kroj. The Rice Resistance Protein Pair RGA4/RGA5 Recognizes the Magnaporthe oryzae Effectors AVR-Pia and AVR1-CO39 by Direct Binding. The Plant Cell, 2013, 25:1463-1481
  • Daniel Marino, Solène Froidure, Joanne Canonne, Sara Ben Khaled, Mehdi Khafif, Cécile Pouzet, Alain Jauneau, Dominique Roby, Susana Rivas. Arabidopsis ubiquitin ligase MIEL1 mediates degradation of the transcription factor MYB30 weakening plant defence. Nature Communications, 2013, 4: 1476 .
  • Céline Courilleau, Catherine Chailleux, Alain Jauneau, Fanny Grimal, Sébastien Briois, Elisa Boutet-Robinet, François Boudsocq, Didier Trouche, and Yvan Canitrot. The chromatin remodeler p400 ATPase facilitates Rad51-mediated repair of DNA double-strand breaks J Cell Biol, 2012 199:1067-1081.
  • Joanne Canonne, Daniel Marino, Alain Jauneau, Cecile Pouzet, Christian Brière, Dominique Roby and Susana Rivas. The Xanthomonas Type III Effector XopD Targets the Arabidopsis Transcription Factor MYB30 to Suppress Plant Defense. Plant Cell, 2011.
  • Katharina Heidrich, Lennart Wirthmueller, Céline Tasset, Cécile Pouzet, Laurent Deslandes and Jane E. Parker. Arabidopsis EDS1 connects pathogen effector recognition to cell compartment specific immune responses. Science 2011.
  • Rose Boutros, Corinne Lorenzo, Odile Mondesert, Alain Jauneau, Vanessa Oakes, Christine Dozier, Brian Gabrielli, Bernard Ducommun. CDC25B associates with a centrin 2-containing complex and is involved in maintaining centrosome integrity.Biol Cell., 2011.
  • Solène Froidure, Xavier Daniel, Joanne Canonne, Alain Jauneau, Christian Brière, Dominique Roby, Susana Rivas. AtsPLA2-α negatively regulates hypersensitive cell death and plant defence through its interaction with the Arabidopsis transcription factor AtMYB30. PNAS, 2010, 107 (34)15281-15286
  • Céline Tasset, Maud Bernoux, Alain Jauneau, Cécile Pouzet, Christian Brière, Sylvie Kieffer-Jacquino, Yves Marco and Laurent Deslandes. The Ralstonia solanacearum effector PopP2 autoacetylates on a lysine residue that is required to trigger plant immune response. PlosPathogens. 2010.
  • Alexandre Perochon, Stefan Dieterle, Cecile Pouzet, Didier Aldon, Jean-Philippe Galaud, Benoit, Ranty. Interaction of a plant pseudo-response regulator with a calmodulin-like protein. BBRC 2010.
  • Bernoux M, Timmers T, Jauneau A, Brière C, de Wit PJ, Marco Y, Deslandes L. RD19, an Arabidopsis Cysteine Protease Required for RRS1-R-Mediated Resistance, Is Relocalized to the Nucleus by the Ralstonia solanacearum PopP2 Effector. Plant Cell., 2008. 20: 2252-2264.

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