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Un outil unique pour caractériser les interactions |
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05 82 52 58 07Le streak-FLIM (Fluorecence Lifetime Imaging Microscopy) est une technique unique développée par la plateforme d’imagerie de la FRAIB et permettant de révéler des interactions protéines-protéines, protéines-ADN ou des changements de conformation spatiale. Basé sur la mesure des durées de vie des fluorochromes, les molécules se transférant l’énergie si elles sont suffisamment proches pour interagir, apporte de nombreuses informations sur ces dernières. Ces mesures sont en revanche indépendantes de la concentration de la molécule et de son intensité de fluorescence.
Services :
- Mise en évidence d’interactions moléculaires (protéine – protéine, protéine – ADN…) par mesure de la durée de vie de fluorescence du donneur en absence ou en présence d’un accepteur.
- Détection par Streak caméra, (Streakscope Hamamatsu) permettant la mesure de durée de vie avec une résolution de l’ordre de la picoseconde.
- Temps d’acquisition variable (de quelques secondes à quelques dizaines de secondes) selon l’intensité de fluorescence et le type d’information recherché (durée de vie par ROI ou sur la base du pixel).
Mode d’accès :
- Assistance
- Projet collaboratif
- Prestation de service
Caractéristiques techniques :
- Microscope inversé Nikon TE2000
- Images x, t (t en pleine échelle variable selon la rampe de tension appliquée aux électrodes de déflection de 1 ns à 1 µs).
- Images x, t avec piles d’images en y.
- Obtention des courbes de décroissance de la fluorescence pour une ROI ou par pixel.
- Détermination des paramètres ai et ti par ajustement au moindre carré des courbes expérimentales obtenues (moindres carrés non linéaires, ou maximum de vraisemblance).
- Traitement des données via logiciel Tau-MAP home-made.
Réservations & Variantes
Désignation |
Contact |
Lieu |
FLIM biphoton
FLIM monophoton
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Cécile Pouzet
05 82 52 58 07 |
FRAIB – Campus INRA Auzeville |
Ressources complémentaires
- Télécharger le manuel du logiciel « Taupography » dédié au streak-FLIM
- « Taupography » est un logiciel développé par la plateforme FRAIB et le laboratoire LRSV et sous licence d’exploitation accordée à « Photon Lines ». Pour toute demande, merci de vous adresser à Thomas Gelot ou Eric Dréan.
Quelques publications réalisées avec le concours de l’instrument :
- A newly evolved chimeric lysin motif receptor-like kinase in Medicago truncatula spp. tricycla R108 extends its Rhizobia symbiotic partnership [Academic Journal] – Luu, Thi-Bich; Ourth, Anna; Pouzet, Cécile; Pauly, Nicolas; Cullimore, Julie – New Phytologist. Sept. 2022, Vol. 235 Issue 5, p1995, 2007 p. DOI: 10.1111/nph.18270
- Ormancey, M., Guillotin, B., Merret, R. et al. Complementary peptides represent a credible alternative to agrochemicals by activating translation of targeted proteins. Nat Commun 14, 254 (2023). >>>
- Camborde L, Kiselev A, Pel MJC, Le Ru A, Jauneau A, Pouzet C, Dumas B, Gaulin E. An oomycete effector targets a plant RNA helicase involved in root development and defense. New Phytol. 2022 Mar;233(5):2232-2248. doi: 10.1111/nph.17918. Epub 2022 Jan 7. PMID: 34913494.
- Diana Ramirez-Garcés, Laurent Camborde, Michiel Pel, Alain Jauneau, Yves Martinez, et al.. CRN 13 candidate effectors from plant and animal eukaryotic pathogens are DNA ‐binding proteins which trigger host DNA damage response. New Phytologist, 2016, 210 (2), pp.602-617. ⟨10.1111/nph.13774⟩. ⟨hal-03807803⟩
- Laurent Camborde, A. Jauneau, Christian Brière, Laurent Deslandes, Bernard Dumas, et al.. Detection of nucleic acid-protein interactions in plant leaves using fluorescence lifetime imaging microscopy. Nature Protocols, 2017, 12 (9), pp.1933-1950. ⟨10.1038/nprot.2017.076⟩. ⟨hal-01607375⟩
- Dorian Farache, Alain Jauneau, Cécile Chemin, Marine Chartrain, Marie-Hélène Rémy, Andreas Merdes and Laurence Haren. Functional analysis of Gamma-tubulin Complex Proteins indicates specific lateral association via their N-terminal domains. JBC, 2016
- A. Testard, D. Da Silva, M Ormancey, C. Pichereaux, C. Pouzet, A. Jauneau, S. Grat, E. Robe, Brière, V. Cotelle, C. Mazars and P. Thulleau. Calcium- and Nitric Oxide-Dependent Nuclear Accumulation of Cytosolic Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase in Response to Long Chain Bases in Tobacco BY-2 Cell. Plant Cell Physiol, 2016
- Marçal Soler, Anna Plasencia, Romain Larbat, Cécile Pouzet, Alain Jauneau, Susana Rivas, Edouard Pesquet, Catherine Lapierre, Isabelle Truchet and Jacqueline Grima-Pettenati. The Eucalyptus linker histone variant EgH1.3 cooperates with the transcription factor EgMYB1 to control lignin biosynthesis during wood formation. New Phytologist, 2016
- Judith Fliegmann, Alain Jauneau, Carole Pichereaux, Charles Rosenberg, Virginie Gasciolli, Antonius C.J. Timmers, Odile Burlet-Schiltz, Julie Cullimore and Jean-Jacques Bono. LYR3, a high-affinity LCO-binding protein of Medicago truncatula, interacts with LYK3, a key symbiotic receptor. Febs Letters, 2016
- Clementine Le Roux,Gälle Huet, Alain Jauneau, Laurent Camborde, Dominique Tremousaygue, Alexandra Kraut, Binbin Zhou, Marie Levaillant, Hiroaki Adachi, Hirofumi Yoshioka, Sylvain Raffaele, Richard Berthome, Yohann Coute, Jane E. Parker,and Laurent Deslandes. A Receptor Pair with an Integrated Decoy Converts Pathogen Disabling of Transcription Factors to Immunity. Cell, 2015
- Josep Vilarrasa-Blasi, Mary-Paz Gonzalez-Garcıa, David Frigola, Norma Fabregas-Vallve, Konstantinos G. Alexiou, Nuria Lopez-Bigas, Susana Rivas, Alain Jauneau, Jan U. Lohmann, Philip N. Benfey, Marta Ibanes, and Ana I. Cano-Delgado Regulation of Plant Stem Cell Quiescence by a Brassinosteroid Signaling Module. Developmental Cell, 2014
- Stella Cesari Gaëtan Thilliez, Cécile Ribot, Véronique Chalvon, Corinne Michel, Alain Jauneau, Susana Rivas, Ludovic Alaux, Hiroyuki Kanzaki, Yudai Okuyama, Jean-Benoit Morel, Elisabeth Fournier, Didier Tharreau, Ryohei Terauchi and Thomas Kroj. The Rice Resistance Protein Pair RGA4/RGA5 Recognizes the Magnaporthe oryzae Effectors AVR-Pia and AVR1-CO39 by Direct Binding. The Plant Cell, 2013, 25:1463-1481
- Daniel Marino, Solène Froidure, Joanne Canonne, Sara Ben Khaled, Mehdi Khafif, Cécile Pouzet, Alain Jauneau, Dominique Roby, Susana Rivas. Arabidopsis ubiquitin ligase MIEL1 mediates degradation of the transcription factor MYB30 weakening plant defence. Nature Communications, 2013, 4: 1476 .